沈阳沈大PCR技术精确定位HIV病毒艾滋病检查

艾滋病的症状十分复杂，应该从艾滋病在临床上的四个分期来分别考量。

从感染艾滋病病毒到发病，有一个完整的自然过程，一般来说，从感染到发病需要2～10年。临床上将这个过程分为四期：急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期。

1、急性感染期

大部分病人在艾滋病急性感染期，有的人没有任何症状。但有一部分病人在感染数天至3个月后，有如流感或传染性单核细胞增多等症状：发热、寒战、关节疼、肌肉痛、呕吐、腹泻、喉痛等。一般在艾滋病毒感染后2至8周出皮疹，血中出现艾滋病毒抗体。此阶段出现的症状，一般可持续3－14日，以后自然消失。

2、无症状感染期/潜伏期

临床上没有任何症状，但人体内有艾滋病毒，因此又称为艾滋病潜伏期。但血清中能检出HIV以及HIV核心和包膜蛋白的抗体。此阶段具有传染性，一般可持续2～10年或更长。

医师提醒：以上两个阶段的艾滋病都可能表现出毫无症状，甚至HIV试纸都无法准确的检测出结果，对怀疑染上艾滋病的患者，一定要及时到院进行彻底的技术检查。

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3、艾滋病前期

无症状感染期之后，人体出现明显的与艾滋病有关的症状和体征，被称之为艾滋病相关综合征，也有人称之为持续性全身淋巴结肿大综合征。主要表现为持续性的淋巴腺肿大，开始于颈部，其次为腋、腹股沟淋巴结等。一般至少有两处以上淋巴结肿大。特点是淋巴结肿大直径在1cm以上，质地柔韧，无压痛，无黏连，能自由活动，一般持续肿大3个月以上。此外还可能有：体重减轻10%以上，持续数月的周期性发热（38摄氏度左右），夜间盗汗，发生单纯疱疹病毒、白色念珠菌（属真菌类）等各种感染。

4、典型艾滋病期

由于免疫系统被严重破坏，各种致命性机会感染、肿瘤等极易发生。病变可表面在肺、口腔、消化系统、神经系统、内分泌系统、心脏、肾脏、眼、关节、皮肤等等。已发生机会性感染者，平均存活期为9个月。

PCR技术在HIV检测中的应用

PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列，这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性；可用来监测长潜伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治疗期间病毒的水平；也可用于HIV-1血清阳性母亲的婴儿的HIV检测。在婴儿出生后最初的6～9个月期间，他们的血液中存在母体的抗体，因此用PCR可判定婴儿是否真正被HIV感染。

1.血清抗体阴性病人的HIV序列的检测

由于在感染HIV后到出现免疫反应之前有一段滞后期，这个血清学阴性的滞后期通常长达6周至6个月，而且无抗体产生期可能更长些。在此期间受感染者往往检测不到抗体，因此，血清阴性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中检测到HIV-1比由血清学转阳确诊的时间可以提高6个月。对少数初次共培养呈阴性的人，甚至可在血清转阳之前24～39个月就能确诊为HIV-1感染。对血清学试验结果不能确定者，也可通过PCR作进一步分析和确诊。

2.血清抗体阳性病人HIV序列的检测

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从血清阳性的HIV感染者的外周血单核细胞中可检测出前病毒序列。通过共培养分离出病毒的血清阳性的同性恋男人血液制备的DNA，用PCR可100%检出病毒序列；用血清阴性共培养阴性同性恋者的标本，经PCR扩增检出病毒序列者为64%，血清阴性正常人标本PCR检测也为阴性，表明未出现假阳性结果。由于HIV-1基因组的广泛的异源性，为提高检测的阳性率可采用多种引物（如LTR，gag和env基因的引物）。利用PCR法从313份已证实为抗体阳性的标本中检测出310份HIV阳性（99%）。

有人从AIDS或ARC病人的外周血单核细胞培养物，精液细胞和精液上清制备DNA。然后用PCR法和逆转录酶测定法分别检测HIV-1。PCR扩增产物与32P标记的探针退火之后用BstNI消化。再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和自显影。结果表明，在逆转录酶阴性的28个细胞系中有9个以及用逆转录酶法不能确定的9个细胞系中有2个为阳性。这说明过去许多细胞培养物认为是阴性者，实际上用更敏感的PCR测定时则为阳性。

PCR技术检测HIV-DNA序列对AIDS和ARC的确诊起着重要作用。但也有人认为 对已知HIV抗体、抗原或培养阳性的病人不必再做PCR。最合适的PCR检测对象是那些疑有HIV感染但又缺乏确切的血清学依据的人群，如上述的HIV阳性母亲所生的婴儿，阳性患者的性伴侣，静脉吸毒者和可疑的血清反应者。PCR技术还可用来检测血液制品及疫苗中有无HIV。